GLuc-ON? 啟動(dòng)子報(bào)告克隆

GLuc-ON? 啟動(dòng)子報(bào)告克隆在GLuc報(bào)告基因上游插入一段1.2~1.5 kb的序列，這段插入序列與基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（TSS）上游大約1.5kb到下游200bp之間的5’側(cè)翼序列一致，可以通過觀察熒光素酶的活性來研究啟動(dòng)子對(duì)基因的調(diào)節(jié)作用。

復(fù)能基因可提供預(yù)制和定制的GLuc-ON? 啟動(dòng)子克隆，包括單報(bào)告基因載體系統(tǒng)和雙報(bào)告基因載體系統(tǒng)。單報(bào)告基因載體系統(tǒng)以Gluc、mCherry或GFP作為啟動(dòng)子的報(bào)告基因；雙報(bào)告基因載體系統(tǒng)以Gluc作為啟動(dòng)子報(bào)告基因，以分泌型堿性磷酸酶 （SEAP）作為信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參，可在活細(xì)胞中對(duì)超過20,000種人和18,000種小鼠啟動(dòng)子進(jìn)行實(shí)時(shí)活性分析。

圖1. GLuc-ON? 啟動(dòng)子報(bào)告克隆的雙報(bào)告基因檢測(cè)原理圖

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

活細(xì)胞分析

    分泌型Gluc報(bào)告子

    無(wú)需裂解細(xì)胞

    節(jié)省樣本，減少突變，簡(jiǎn)化試驗(yàn)流程（如脈沖追蹤分析等）

實(shí)時(shí)研究

    可獲得即時(shí)檢測(cè)數(shù)據(jù)

    與實(shí)時(shí)活性分析過程類似

分泌型雙報(bào)告系統(tǒng)

    分泌型Gluc和分泌型堿性磷酸酶

    對(duì)多樣本常規(guī)轉(zhuǎn)染進(jìn)行精確比較

高通量兼容

    可用于信號(hào)通路研究

    可進(jìn)行高通量研究

高靈敏度

    GLuc比螢火蟲或Renilla熒光素酶靈敏度高1000倍

使用方便

    所有啟動(dòng)子報(bào)告克隆均可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染

Gaussia 熒光素酶

GLuc-ON? 啟動(dòng)子克隆采用經(jīng)過修飾的GLuc（mGLuc）作為報(bào)告基因，能產(chǎn)生強(qiáng)烈且穩(wěn)定的熒光信號(hào)，克服了人野生型GLuc（wtGLuc）信號(hào)衰退快的缺點(diǎn)。

圖2. mGLuc (藍(lán)色) 和 wtGLuc (紅色)的信號(hào)穩(wěn)定性比較。左側(cè)：含有穩(wěn)定劑的緩沖液；右側(cè)：常規(guī)緩沖液。

雙報(bào)告系統(tǒng)

GLuc-ON? 啟動(dòng)子克隆可以將分泌型堿性磷酸酶（SEAP）作為第二個(gè)報(bào)告子和內(nèi)參。這種雙報(bào)告系統(tǒng)可以對(duì)多樣本常規(guī)轉(zhuǎn)染進(jìn)行精確比較。

圖3. 不同啟動(dòng)子在H1B1B和HEK293T細(xì)胞中的活性分析。雙報(bào)告系統(tǒng)啟動(dòng)子克隆和對(duì)照以兩個(gè)重復(fù)轉(zhuǎn)染進(jìn)兩種細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染24小時(shí)（(HEK293T）和48小時(shí)（H1B1B）后分析樣品。NEG（包含非啟動(dòng)子序列）和EMPTY（載體不含啟動(dòng)子）作為陰性對(duì)照。

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