Genome-TALER? TALEN 和 TALE定制服務(wù)

TALEs首先是在植物病原菌黃單胞菌(Xanthomonas)中發(fā)現(xiàn)的。當(dāng)感染植物時(shí)，病原菌分泌的TALEs識(shí)別宿主植物靶基因的啟動(dòng)子區(qū)，調(diào)控相應(yīng)基因的表達(dá)。TALE蛋白中間含有一個(gè)重復(fù)區(qū)域，該區(qū)域由33-35個(gè)氨基酸的重復(fù)單元組成。每個(gè)重復(fù)單元的氨基酸序列高度保守，除了第12位和13位的兩個(gè)氨基酸可變，即重復(fù)單元可變的雙氨基酸殘基（RVD）。TALE單體通過RVD識(shí)別DNA靶點(diǎn)上的堿基，有如下一一對(duì)應(yīng)關(guān)系：NI = A, HD = C, NG = T,NN = G 或 A。

轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)子(TAL effectors)已廣泛應(yīng)用于靶向基因組操作蛋白的制備：通過融合表達(dá)核酸酶、轉(zhuǎn)錄因子或其他功能的結(jié)構(gòu)域構(gòu)建位點(diǎn)特異的內(nèi)切酶（TALEN）、靶基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子（TALE-TFs）或者其他基因組修飾蛋白。TALE融合蛋白通過TALE特異性識(shí)別結(jié)合染色體上靶序列進(jìn)行靶向基因組編輯，比如基因敲除、基因敲入（結(jié)合使用重組供體質(zhì)粒）、基因組修飾、基因轉(zhuǎn)錄激活或抑制等。不同于識(shí)別3聯(lián)體堿基的鋅指蛋白，TALE單體通過一一對(duì)應(yīng)的關(guān)系精確識(shí)別單個(gè)堿基（A, T, C, G），因此可以針對(duì)基因組上任意目標(biāo)序列設(shè)計(jì)組建TALE模塊。

圖 1. TALEN設(shè)計(jì)示意圖

圖 2. TALE-TF設(shè)計(jì)示意圖

TALEN 及 CRISPR-Cas9 體系應(yīng)用對(duì)比

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TALEN 和 TALE